Análisis de autoanticuerpos anti-C1q mediante Western Blot

 

La técnica de Western blot es utilizada para analizar autoanticuerpos anti-C1q en muestras humanas, centrándose en los genes de las cadenas de proteínas B y C de C1q. Ayudando así a identificar técnica patrones de unión distintos en pacientes con lupus eritematoso sistémico (SLE) y síndrome de vasculitis urticarial hipocomplementémica (HUVS), ayudando así a la diferenciación entre ambas enfermedades. El análisis de Western blot es de suma importancia para detectar autoanticuerpos específicos y además ayuda a complementar la monitorización de enfermedades autoinmunes (1).

Imagen 1 Fotografía que muestra resultados representativos del análisis de transferencia Western de autoanticuerpos anti-C1q. La muestra positiva de la izquierda (tira 1) es positiva para anticuerpos que se unen a las cadenas B y C de C1q; muestra negativa a la derecha (tira 2). Se indican las posiciones de las cadenas C1q separadas A, B y C:Verlemyr A, Truedsson L, Skattum L. Analysis of anti-C1q autoantibodies by western blot. En: Autoantibodies [Internet]. New York, NY: Springer New York; 2019 [citado el 23 de junio de 2024];. p. 183–9. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1007/978-1-4939-8949-2_14

BIBLIOGRAFÍA:

1. Verlemyr A, Truedsson L, Skattum L. Analysis of anti-C1q autoantibodies by western blot. En: Autoantibodies [Internet]. New York, NY: Springer New York; 2019 [citado el 23 de junio de 2024];. p. 183–9. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1007/978-1-4939-8949-2_14

Prueba PCR para tuberculosis

Tema: Diagnóstico para la Tuberculosis con PCR en tiempo real.

Objetivo: Utilizar pruebas moleculares para detectar y diagnosticar enfermedades infecciosas, identificar cambios genéticos y detectar células cancerosas en etapas tempranas.

Tipo de muestra biológica: Sangre (sangre periférica) 

Tipo de ácido nucleico: ADN bacteriano, gen rpoB

Extracción (Lisis, separación, purificación): 

1. Método de lisis por calor: Este método implica calentar las muestras clínicas para romper las células bacterianas y liberar el ADN. 

2. Kits de extracción de ADN: Estos kits utilizan columnas de centrifugación y tampones especializados para purificar el ADN de muestras clínicas. Están diseñados para aislar de manera eficiente el ADN, incluido el de Mycobacterium tuberculosis, para análisis de PCR. 

3. El paso siguiente extracción de fenol-cloroformo: Este método clásico implica el uso de fenol-cloroformo para separar el ADN de otros componentes de la muestra. Por último existen varios kits para extraer ADN de Mycobacterium tuberculosis en muestras clínicas. Estos kits a menudo proporcionan protocolos paso a paso para el aislamiento eficiente del ADN. Una vez extraído el ADN mediante uno de estos métodos, puede usarse como plantilla para la amplificación por PCR para detectar la presencia de ADN de Mycobacterium tuberculosis.

Gen o secuencia a analizar: La amplificación de la secuencia IS6110 en la PCR permite la detección y el diagnóstico de la tuberculosis. 

Tamaño en pares de bases:  El tamaño del fragmento amplificado que contiene la secuencia IS6110 es de aproximadamente 123 pares de bases.

Tipo de PCR: PCR convencional

Pasos:

• Desnaturalización: 94°C - 96°C por 5 a 30 segundos.
• Hibridación: 44°C - 55°C por 5 - 30 segundos.
• Elongación: alrededor de 72 °C por 30 segundos.
• Número de copias: 1UI=3,41 copias 

Visualización: La visualización y análisis detallados de los resultados requieren el uso del software proporcionado por el fabricante del termociclador en tiempo real utilizado, así facilitar la interpretación de las curvas de amplificación y la cuantificación de la carga viral.

Imagen 1 Sensibilidad analítica de la prueba de PCR: Rodríguez B PS, Rivera P ZM, Suárez Blandenier L, Correa de H MF, Rabucha A, de Suárez C, et al. Tuberculosis pleural: Utilidad de la reacción en cadena de la polimerasa en muestras de tejido. Gac Med Caracas [Internet]. 2009 [citado el 16 de junio de 2024];117(3):231–42. Disponible en: https://ve.scielo.org/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0367-47622009000300008

BIBLIOGRAFÍA:

1. Arias M F, Herrera M T. Nuevos métodos para el diagnóstico de la tuberculosis. Rev Chil Enferm Respir [Internet]. 2016 [citado el 16 de junio de 2024];32(4):254–9. Disponible en:https://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0717-73482016000400007

2. Revollo Zepita S, Taborga Manrique X. Diagnóstico de tuberculosis extrapulmonar mediante la reacción en cadena de la polimerasa. RevCsFarm y Bioq [Internet]. 2013 [citado el 16 de junio de 2024];1(1):37–46. Disponible en:http://www.scielo.org.bo/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S2310-02652013000100006

Alteración de la Epigenética en la cirrosis

 

La cirrosis es una condición crónica y progresiva donde el  hígado se va cicatrizando, en los pacientes se han observado cambios epigenéticos específicos como la hipermetilación aberrante que inactiva genes que se relacionan con el control celular, apoptosis y reparación del AND. La alteración se relaciona con la activación o inactivación de las células estrelladas hepáticas (HSCs), mediada por microARNs, de esta manera pueden promover la producción de matriz extracelular para la cicatrización. (1)

Imagen 1  Mecanismos epigenéticos que influyen en los genes:  Mann DA. Epigenetics in liver disease. Hepatology [Internet]. 2014;60(4):1418–25. Disponible en:http://dx.doi.org/10.1002/hep.27131

BIBLIOGRAFÍA:

1. Mann DA. Epigenetics in liver disease. Hepatology [Internet]. 2014;60(4):1418–25. Disponible en:http://dx.doi.org/10.1002/hep.27131

Alteraciones en la traducción genética del COVID-19

 

COVID-19, es una enfermedad infecciosa provocada por el virus SARS-CoV-2 .En la alteración de la traducción existen los ribosomas que se encargan de la síntesis de proteínas, leen el ARNm y ensamblan las proteínas a partir de aminoácidos, de esta forma la síntesis de proteínas es afectada por la interacción del virus con los ribosomas, es decir se altera la producción de proteínas celulares. El virus codifica la proteína espiga (S) cuando existe alteración en la proteína afecta la replicación viral.

Imagen 1 Forma y estructura del virión de SARS-CoV-2: Pastrian-Soto G. Bases Genéticas y Moleculares del COVID-19 (SARS-CoV-2). Mecanismos de Patogénesis y de Respuesta Inmune. Int J Odontostomatol [Internet]. 2020 [citado el 2 de junio de 2024];14(3):331–7.Disponible en:https://www.scielo.cl/scielo.php?pid=S0718-381X2020000300331&script=sci_arttext

BIBLIOGRAFÍA:

1.  Pastrian-Soto G. Bases Genéticas y Moleculares del COVID-19 (SARS-CoV-2). Mecanismos de Patogénesis y de Respuesta Inmune. Int J Odontostomatol [Internet]. 2020 [citado el 2 de junio de 2024];14(3):331–7. Disponible en:https://www.scielo.cl/scielo.php?pid=S0718-381X2020000300331&script=sci_arttext